Calcul loi de Beer-Lambert
Ce calcul loi de Beer-Lambert résout A = ε·l·c pour l’absorbance, la concentration ou le coefficient d’absorption molaire. Exemple : ε = 6220 L/(mol·cm), 1 cm et 50 µmol/L donnent A = 0,311.
Exemple : Que calculer: Absorbance A (et transmittance) · Coefficient d’absorption molaire ε 6 220 L/(mol·cm) · Trajet optique l (cuve) 1 cm · Concentration c 50 µmol/L → Résultat : A = 0,311 · transmittance T = 48,8652 %. Source : IUPAC Gold Book: Beer–Lambert law (A = ε·c·l). Mise à jour : .
Comment le calcul est fait
La loi de Beer-Lambert décrit l’atténuation de la lumière d’une longueur d’onde donnée par une solution. L’absorbance A est proportionnelle à la concentration du corps et au trajet optique : c’est la base de la photométrie.
Formule
A = ε · l · c, avec le coefficient d’absorption molaire ε en L/(mol·cm), le trajet optique l en cm et la concentration c en mol/L. La transmittance est T = I / I₀ = 10^(−A), et inversement A = −log₁₀(T). En réarrangeant : c = A / (ε·l) ou ε = A / (l·c).
Exemple
Le NADH absorbe à 340 nm avec ε = 6 220 L/(mol·cm). Dans une cuve de 1 cm à c = 50 µmol/L, A = 6 220 · 1 · 50 · 10⁻⁶ = 0,311 et la transmittance vaut T = 10^(−0,311) = 48,8652 %. Inversement, A = 0,311 avec le même ε et l donne c = 50 µmol/L, et de A, l et c on tire ε = 6 220 L/(mol·cm). À A = 1, 10 % de la lumière passe ; à A = 2, seulement 1 %.
- L’absorbance est logarithmique : une hausse de 1 signifie dix fois moins de lumière transmise.
- Mesurez de préférence entre A = 0,1 et 1 ; au-delà, diluez.
- La mesure exige un blanc (cuve avec solvant) comme zéro.
Questions fréquentes
Quelle différence entre absorbance et transmittance ?
La transmittance T est le pourcentage de lumière transmise ; l’absorbance vaut A = −log₁₀(T/100). A = 0,311 correspond à T = 48,8652 %.
Comment calculer la concentration à partir de l’absorbance ?
Avec c = A / (ε·l). Pour A = 0,311, ε = 6 220 L/(mol·cm) et l = 1 cm, on obtient 50 µmol/L.
Jusqu’à quelle absorbance la loi est-elle valable ?
Selon l’appareil, jusqu’à environ A = 1 à 1,5. Au-delà, la lumière parasite compte et il faut diluer l’échantillon.
Sources et références juridiques
- IUPAC Gold Book: Beer–Lambert law (A = ε·c·l)
- Harris, Quantitative Chemical Analysis, Kap. „Spectrophotometry“
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