Calcolo legge di Lambert-Beer
Questo calcolo legge di lambert-beer risolve A = ε·l·c per assorbanza, concentrazione o coefficiente di assorbimento molare. Esempio: ε = 6220 L/(mol·cm), 1 cm e 50 µmol/L danno A = 0,311.
Esempio: Che cosa calcolare: Assorbanza A (e trasmittanza) · Coefficiente di assorbimento molare ε 6220 L/(mol·cm) · Cammino ottico l (cuvetta) 1 cm · Concentrazione c 50 µmol/L → Risultato: A = 0,311 · trasmittanza T = 48,8652 %. Fonte: IUPAC Gold Book: Beer–Lambert law (A = ε·c·l). Aggiornato al: .
Come si calcola
La legge di Lambert-Beer descrive quanto una soluzione attenua la luce di una data lunghezza d’onda. L’assorbanza A è proporzionale alla concentrazione della sostanza e al cammino ottico: è la base della fotometria.
Formula
A = ε · l · c, con il coefficiente di assorbimento molare ε in L/(mol·cm), il cammino ottico l in cm e la concentrazione c in mol/L. La trasmittanza è T = I / I₀ = 10^(−A) e, all’inverso, A = −log₁₀(T). Riordinando: c = A / (ε·l) oppure ε = A / (l·c).
Esempio
L’NADH assorbe a 340 nm con ε = 6220 L/(mol·cm). In una cuvetta da 1 cm con c = 50 µmol/L, A = 6220 · 1 · 50 · 10⁻⁶ = 0,311 e la trasmittanza è T = 10^(−0,311) = 48,8652 %. All’inverso, A = 0,311 con lo stesso ε e l dà c = 50 µmol/L, e da A, l e c si ottiene ε = 6220 L/(mol·cm). Con A = 1 passa il 10 % della luce; con A = 2 solo il 1 %.
- L’assorbanza è logaritmica: un aumento di 1 significa dieci volte meno luce trasmessa.
- Conviene misurare tra A = 0,1 e 1; oltre, diluire.
- La misura richiede un bianco (cuvetta con solvente) come zero.
Domande frequenti
Che differenza c’è tra assorbanza e trasmittanza?
La trasmittanza T è la percentuale di luce che passa; l’assorbanza è A = −log₁₀(T/100). A = 0,311 corrisponde a T = 48,8652 %.
Come calcolo la concentrazione dall’assorbanza?
Con c = A / (ε·l). Per A = 0,311, ε = 6220 L/(mol·cm) e l = 1 cm si ottengono 50 µmol/L.
Fino a quale assorbanza vale la legge?
A seconda dello strumento, fino a circa A = 1–1,5. Oltre pesa la luce diffusa e il campione va diluito.
Fonti e riferimenti normativi
- IUPAC Gold Book: Beer–Lambert law (A = ε·c·l)
- Harris, Quantitative Chemical Analysis, Kap. „Spectrophotometry“
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