Lambert-Beer-Gesetz berechnen
Hier können Sie das Lambert-Beer-Gesetz berechnen: Absorbanz, Konzentration oder Extinktionskoeffizient. Beispiel: ε = 6220 L/(mol·cm), 1 cm, 50 µmol/L ergeben A = 0,311.
Beispiel: Was soll berechnet werden: Absorbanz A (und Transmission) · Molarer Extinktionskoeffizient ε 6.220 L/(mol·cm) · Schichtdicke l (Küvette) 1 cm · Konzentration c 50 µmol/L → Ergebnis: A = 0,311 · Transmission T = 48,8652 %. Quelle: IUPAC Gold Book: Beer–Lambert law (A = ε·c·l). Stand: .
So wird gerechnet
Das Lambert-Beer-Gesetz beschreibt, wie stark eine Lösung Licht einer bestimmten Wellenlänge schwächt. Die Absorbanz A ist proportional zur Konzentration des Stoffs und zur durchstrahlten Schichtdicke – die Grundlage der Photometrie.
Formel
A = ε · l · c mit dem molaren Extinktionskoeffizienten ε in L/(mol·cm), der Schichtdicke l in cm und der Konzentration c in mol/L. Die Transmission ist T = I / I₀ = 10^(−A), und umgekehrt A = −log₁₀(T). Stellt man um, folgt c = A / (ε·l) beziehungsweise ε = A / (l·c).
Beispiel
NADH absorbiert bei 340 nm mit ε = 6.220 L/(mol·cm). In einer 1-cm-Küvette mit c = 50 µmol/L ist A = 6.220 · 1 · 50 · 10⁻⁶ = 0,311, die Transmission beträgt T = 10^(−0,311) = 48,8652 %. Umgekehrt liefert A = 0,311 bei gleichem ε und l die Konzentration c = 50 µmol/L, und aus A, l und c folgt ε = 6.220 L/(mol·cm). Bei A = 1 gehen 10 % des Lichts durch, bei A = 2 nur noch 1 %.
- Die Absorbanz ist logarithmisch: Eine Erhöhung um 1 bedeutet zehnmal weniger durchgelassenes Licht.
- Messen Sie am besten im Bereich A = 0,1 bis 1; darüber verdünnen.
- Die Messung braucht einen Blindwert (Küvette mit Lösungsmittel) als Nullpunkt.
Häufige Fragen
Was ist der Unterschied zwischen Absorbanz und Transmission?
Die Transmission T ist der Anteil des durchgelassenen Lichts in Prozent, die Absorbanz A = −log₁₀(T/100). A = 0,311 entspricht T = 48,8652 %.
Wie berechne ich die Konzentration aus der Absorbanz?
Mit c = A / (ε·l). Für A = 0,311, ε = 6.220 L/(mol·cm) und l = 1 cm sind das 50 µmol/L.
Bis zu welcher Absorbanz gilt das Gesetz?
Je nach Gerät bis etwa A = 1 bis 1,5. Darüber wird Streulicht relevant, und die Probe sollte verdünnt werden.
Quellen und Rechtsgrundlagen
- IUPAC Gold Book: Beer–Lambert law (A = ε·c·l)
- Harris, Quantitative Chemical Analysis, Kap. „Spectrophotometry“
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